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Objectifs de la semaine 2
- Obtenir des cellules d’E. coli contenant les plasmides d’expression des enzymes de type sauvage adaptés.
- Préparer le milieu d’auto-induction (laboratoire 1)
- Commencer l’expression de 40 à 48 heures des échantillons de protéines de contrôle de type sauvage et sfGFP.
- Déterminer le type de gel de polyacrylamide à utiliser pour le gel des protéines brutes (SDS-PAGE) en utilisant les données sur la structure anticipée de la protéine et le poids moléculaire (laboratoire 1).
- Préparer les tampons SDS-PAGE.
- Récolter les cellules et préparer les échantillons pour le gel de protéines brutes (laboratoire 2).
- Verser et effectuer le SDS-PAGE sur les échantillons bruts (laboratoire 2).
- Commencer une recherche documentaire sur les procédures de dosage afin de tester la cinétique de l’enzyme. Des ressources seront fournies sur Canvas.
- Analyser la production de protéines par SDS-PAGE
- Séparer les protéines sur le gel de polyacrylamide
- Fixer et colorer les protéines sur le gel
- Réaliser une image numérique du gel
- Lire les procédures de purification des protéines.
- Préparer les tampons de purification.
- Affiner l’hypothèse et finaliser la sélection des mutations et des ncAA pour le projet de fin de semestre.
Avant la fin de journée du jeudi de la semaine 2 :
- Informer le professeur de la protéine, des mutations et des ncAA qui seront utilisés.
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Réflexions approfondies sur le savoir-être en laboratoire Maintenant que vous vous lancez dans la composante expérimentale de ce cours, il est important de prendre conscience des règles de savoir-être en laboratoire à adopter. Vous travaillez dans un espace de laboratoire partagé avec de nombreux autres étudiants, dont votre groupe de laboratoire, mais aussi les autres groupes de laboratoire de votre classe ET les groupes de laboratoire des autres sections, dont certains utilisent la même paillasse que vous. Vous devez tenir compte de toutes ces personnes ainsi que des enseignants et des assistants d’enseignement lorsque vous travaillez dans le laboratoire. Cela représente beaucoup de gens! Voici quelques recommandations : · Nettoyez après votre passage. Nettoyez votre paillasse et toutes les zones communes du laboratoire immédiatement après les avoir utilisées (cela comprend le nettoyage de la zone de pesée, le remplissage des boîtes d’embouts de pipettes, etc.) · Faites preuve de courtoisie et de respect. Respectez les membres de votre groupe et les autres personnes présentes dans le laboratoire. Respectez les affaires des autres; n’utilisez pas ni n’interférez avec les expériences ou les réactifs de quelqu’un d’autre. · Préparez-vous. On attend de vous que vos préparations soient faites avant la journée au laboratoire. Élaborez un plan à l’avance pour savoir ce que votre groupe souhaite accomplir en laboratoire et comment vous comptez vous y prendre pour y parvenir. Vous disposez d’un temps limité pour travailler en laboratoire. Le fait d’arriver avec un plan déjà prêt est non seulement respectueux pour les autres membres de votre groupe et les enseignants, mais vous aidera également à travailler de manière efficace. · Utilisez les ressources du laboratoire à bon escient. Les réactifs et les fournitures sont dispendieux et vos frais de laboratoire ne couvrent qu’une partie des coûts de fonctionnement de ce laboratoire réservé aux projets. · Utilisez des étiquettes. Toutes vos fournitures doivent être correctement étiquetées avec le nom de votre groupe et leur contenu. Cela permet non seulement d’aider les autres membres du groupe à trouver les réactifs nécessaires, mais aussi d’éviter les risques et les problèmes liés à la manipulation de réactifs inconnus en cas de déversement ou de nettoyage. · Faites preuve de ponctualité. Tout comme vous arriveriez à l’heure pour un cours magistral, on attend de vous que vous arriviez à l’heure et que vous soyez prêt à travailler dès le début du cours. · Faites preuve de prudence. Respectez toutes les procédures de sécurité adaptées et posez des questions si vous en avez. |
