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Méthodes de purification et de dessalage des protéines

 

Une fois les échantillons liés à la résine d’affinité métallique, les procédures de purification et de dessalage sont clairement décrites dans les manuels des fabricants respectifs.  Pour préparer les culots cellulaires à se lier à la résine, les cellules seront passées dans le microfluidiseur Mehl Core Lab, puis les cellules lysées seront centrifugées. Une autre solution consiste à soniquer et à centrifuger les cellules conformément à la procédure générale décrite plus loin dans ce manuel.  Notez que tout au long du processus de purification, les échantillons doivent être conservés sur de la glace afin d’éviter que les protéines les moins stables ne se déploient.

Parmi les trois types de culots cellulaires conservés à -80° C, purifiez au moins un culot de chaque type. Conservez les culots restants à -80°C. D’autres expressions de protéines peuvent être réalisées ultérieurement si nécessaire.  Notez toutefois qu’un préavis d’au moins trois jours est nécessaire pour préparer des cultures de départ non inductives.