Annexe 4 : Milieux non inductifs ou à auto-induction

Milieu non inductif pour cultures de départ

Lors de l’inoculation du milieu à auto-induction par les cellules, il est possible d’utiliser des cultures de départ saturées dans un milieu riche (c.-à-d. des cellules saturées dans un bouillon 2XYT).  Cependant, il est également possible d’utiliser des cultures de départ saturées cultivées dans un milieu non inductif, qui sont stables pendant une période beaucoup plus longue lorsqu’elles sont conservées à 4 °C (jusqu’à une semaine, voire au-delà).  Pour fabriquer 1 litre de milieu non inductif, suivez les instructions ci-dessous.

Milieu non inductif pour cultures de départ (1 l)

Aspartate (5 %, pH 7,5)                      50 ml

Sels minéraux (25 x)                            40 ml

Glucose (40 %)                                    12,5 ml

MgSO4 (1 M)                                         2 ml

Métaux traces (5 000 x)                     200 ml

Mélange de 18 AA (25 x) (à 4°C)       40 ml (pour une croissance plus rapide de la culture de départ)

Ajoutez les antibiotiques appropriés (ampicilline à une concentration finale de 100 mg/ml et tétracycline à 25 mg/ml).

Ajoutez de l’eau stérile pour obtenir un volume final de 1 l.

Environ 4 à 5 ml de milieu non inductif suffit pour un milieu de départ d’une culture cellulaire spécifique.  Inoculez ce volume de milieu de départ non inductif avec 40 à 50 ml de 2XYT saturé ou autre culture de départ en milieu saturé.

Milieu à auto-induction pour les expressions

Pour fabriquer 100 ml de milieu à auto-induction (AIM), suivez les instructions ci-dessous.

Ajustez la quantité à fabriquer nécessaire à votre expérience en fonction des quantités suivantes pour 100 ml.  Préparez un mélange frais et ne prévoyez pas de stocker le milieu à auto-induction en excès.

Aspartate (5 %, pH 7,5)                                       5 ml

Glycérol (10 %)                                                      5 ml

Sels minéraux (25x)                                              4 ml

Glucose (40 %)                                                     0,125 ml

MgSO4 (1 M)                                                         0,2 ml

Arabinose (20 %)                                                 0,25 ml

Métaux traces (5 000x)                                      20 ml

Mélange de 18 AA (25x) conservé à 4 °C         4 ml

Ajoutez les antibiotiques appropriés (ampicilline à une concentration finale de 100 mg/ml et tétracycline à 25 mg/ml).

Ajoutez de l’eau stérile pour obtenir un volume final de 100 ml.