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Objectifs des semaines 5 à 9
- Élaborer un dosage cinétique et déterminer les constantes catalytiques pour les enzymes de type sauvage et mutantes ncAA (voir ci-dessous les conseils de réalisation d’un dosage).
- Modifier le dosage en fonction des besoins pour obtenir des résultats significatifs et reproductibles. Purifier de la protéine supplémentaire si nécessaire.
- Obtenir les paramètres cinétiques pour les enzymes de type sauvage et les enzymes mutantes ncAA, afin que des comparaisons puissent être effectuées, à la fois par rapport aux valeurs de la littérature et par rapport aux enzymes testées dans cette expérience.
- Concevoir et exécuter des dosages individuels pour la structure de la protéine et sa fonction.
- En vous basant sur la structure connue de l’enzyme, justifier les résultats obtenus et tenter de déterminer la relation structure-fonction de ce site en particulier.
- Concevoir et effectuer des expériences pour tester vos hypothèses concernant la structure et la fonction.
- Effectuer une analyse par spectrométrie de masse des protéines purifiées pour confirmer la composition attendue (si un créneau de spectrométrie de masse est disponible pour les travaux pratiques).
