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         Les étudiants auront besoin de leurs ordinateurs portables pour effectuer une recherche documentaire sur l’enzyme, sa séquence génétique, les ncAA potentiels et les sites d’incorporation.

·         Télécharger et étudier la structure cristalline de l’enzyme.

·         Examiner les ncAA et les sites qui seront étudiés tout au long du semestre.

Afin d’éviter la congestion dans l’utilisation du matériel pour les dosages cinétiques, trois groupes dans chaque section ont été assignés à l’anhydrase carbonique et trois groupes à la catalase.

·         Mélanger le milieu à auto-induction et obtenir les cellules d’E. coli avec les plasmides d’expression adaptée pour que le processus d’expression de la protéine de type sauvage commence dans la nuit.

·         Élaborer une hypothèse expérimentale sur la base des ncAA et des sites que votre équipe a choisi d’étudier.

·         Indiquer au professeur, avant le jeudi de la semaine 2 à 17 h, quels sont les sites protéiques et les ncAA qui seront exprimés, afin que les cultures de départ puissent être préparées pour la 3^e semaine du cours.

·         Commencer une recherche documentaire sur les procédures de dosage.

·         Récolter les cellules 48 heures après l’induction et les conserver à -80 °C.

        Préparer les solutions SDS-PAGE.

·         Analyser la production de protéine de type sauvage par SDS-PAGE brute.

·         Mélanger le milieu à auto-induction et obtenir les cellules d’E. coli avec les plasmides d’expression adaptée pour que le processus d’expression de protéines mutantes ncAA de type sauvage commence dans la nuit.

·         Préparer les tampons de purification des protéines.

·         Se familiariser avec la procédure de dosage.

·         Éliminer les cellules d’E. coli pour purifier la protéine de type sauvage.

·         Créer les tampons de dosage ou de stockage.

·         Dessaler les protéines de type sauvage dans le tampon de dosage ou de stockage.

·         Récolter les cellules 48 heures après l’induction et les conserver à -80 °C.

·         Analyser la production de protéines mutantes ncAA par SDS-PAGE brute.

·         Analyser les protéines de type sauvage purifiées par SDS-PAGE.

·         Déterminer le taux de concentration en protéines.

·         Déterminer si la protéine pure est active.

·         Purifier les protéines mutantes ncAA des cellules.

·         Commencer les essais de dosage cinétique préalables avec les protéines de type sauvage.

·         Analyser les protéines mutantes ncAA purifiées par SDS-PAGE.

·         Déterminer le taux de concentration en protéine.

·         Déterminer si la protéine pure est active.

·         Le travail final et les carnets de notes doivent être rendus le lundi de la semaine des examens finaux à 16 h.